氧化菌基因表达分析
检测项目
基因表达水平检测:
- 转录水平:mRNA表达量(阈值≥1.5倍变化)、表达强度(参照ISO20395)
- 蛋白质表达:表达丰度(检测限0.1ng/μL)、磷酸化状态(参照GB/T34796)
- 上调基因:foldchange≥2(p<0.05)、差异倍数(标准偏差≤0.2)
- 下调基因:foldchange≤0.5(显著性水平α=0.01)
- RNA-seq:测序深度(≥50x)、覆盖度(≥98%)
- 文库构建:片段大小(200-500bp)、GC含量(40-60%)
- 纯度检测:A260/A280比值(≥1.8)、完整性(RIN≥7)
- 浓度测定:检测限0.01ng/μL、相对误差≤5%
- qPCR验证:Ct值(变异系数≤2%)、扩增效率(90-110%)
- WesternBlot:条带强度(灰度值≥100)、特异性(参照ISO17025)
- GO富集:富集因子(≥2)、p值校正(FDR<0.05)
- KEGG通路:通路覆盖率(≥70%)、显著性(q值<0.01)
- 氧化通路:基因数(≥10)、富集分数(≥0.5)
- 应激响应:表达变化率(≥30%)、参照GB/T35189
- 共表达网络:相关系数(|r|≥0.8)、模块大小(≥50基因)
- 调控因子:结合位点预测(置信度≥90%)
- 时间序列:表达峰值(时间点±10min)、衰减率(≤20%/h)
- 剂量响应:EC50值(95%置信区间)
- 启动子活性:荧光强度(RFU≥500)、抑制效率(≥80%)
- 表观遗传:甲基化水平(检测限1%)、组蛋白修饰(参照ISO45001)
检测范围
1.硝化细菌菌株:包括Nitrosomonaseuropaea和Nitrobacterwinogradskyi,检测重点为氨氧化酶基因(amoA)和亚硝酸氧化酶的表达动态,评估氮循环效率。
2.厌氧氨氧化菌:如Brocadiaanammoxidans,检测亚硝酸还原酶(nirS)和肼合酶基因表达,聚焦低氧环境下的代谢通路活性。
3.硫氧化细菌:涵盖Acidithiobacillusferrooxidans,检测硫代硫酸盐氧化酶和铁氧化基因表达,强调酸性条件下的应激响应。
4.甲烷氧化菌:如Methylococcuscapsulatus,检测甲烷单加氧酶(pmoA)表达,分析甲烷代谢通路的调控机制。
5.铁氧化菌:包括Leptospirillumferrooxidans,检测细胞色素c氧化酶表达,评估铁矿环境中的能量转化效率。
6.锰氧化菌:如Pseudomonasputida,检测锰氧化酶基因表达,重点监测重金属胁迫下的适应性变化。
7.好氧氨氧化菌:如Nitrosospiramultiformis,检测氨单加氧酶表达,分析氧浓度梯度下的表达差异。
8.复合氧化菌群落:涵盖混合菌群样本,检测多基因协同表达,评估废水处理系统中的协同效率。
9.极端环境氧化菌:如Thermusaquaticus,检测热休克蛋白表达,聚焦高温条件下的稳定性分析。
10.工程改造菌株:包括基因编辑氧化菌,检测外源基因插入表达,评估生物修复应用中的表达一致性。
检测方法
国际标准:
- ISO20395:2019生物技术-定量PCR方法(使用SYBRGreen染料)
- ISO17025:2017检测和校准实验室能力通用要求(涵盖RNA提取步骤)
- ISO45001:2018转录组数据分析规范(包括差异表达算法)
- GB/T34796-2017核酸定量测定方法(规定分光光度法参数)
- GB/T35189-2017转录组测序方法(指定文库构建流程)
- GB/T37869-2019蛋白质表达检测方法(采用WesternBlot技术)
检测设备
1.实时荧光定量PCR仪:AppliedBiosystems7500(灵敏度0.1copy/μL,温控精度±0.1°C)
2.高通量测序仪:IlluminaNovaSeq6000(通量20Gb/run,读长2x150bp)
3.微量分光光度计:NanoDropOne(波长范围190-840nm,检测限0.2ng/μL)
4.生物分析仪:Agilent2100(RNA完整性检测,分辨率1-50ng/μL)
5.离心机:Eppendorf5430R(转速范围100-30,000rpm,容量4x100mL)
6.WesternBlot系统:Bio-RadMini-PROTEAN(转移电压100V,检测限5pg)
7.凝胶成像仪:ChemiDocMP(分辨率4.2MP,动态范围4orders)
8.恒温培养箱:MemmertINCO(温度范围5-60°C,精度±0.1°C)
9.超低温冰箱:ThermoScientificForma(温度-86°C,容量700L)
10.震荡培养箱:INFORSHTMultitron(转速50-300rpm,CO2控制0-20%)
11.核酸提取仪:QIAGENQIAcube(通量96样本/run,回收率≥95%)
12.电泳系统:Bio-RadPowerPac(电压范围10-300V,电流1A)
13.荧光显微镜:OlympusBX53(放大倍数1000x,分辨率0.2μm)
14.酶标仪:TecanInfiniteM200(波长范围230-1000nm,精度±1%)
15.生物安全柜:EscoAirstream(风速0.45m/s,HEPA过滤效率99.99%)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。